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Analyse des BMP-Signalwegs in U2OS-Zellen Vorgehen Um den BMP-Signalweg in U2OS-Zellen zu charakterisieren, wurden Pulldown-Versuche mit dem BMP-Rezeptor ALK2 durchgeführt Zunächst wurden wiederum die Aufreinigungsbedingungen für ALK2 wild-type und die ALK2 R206H-Mutanten aus U2OS optimiert Aufreinigungen im Pilotmassstab wurden zuerst mittels Western Blotting analysiert, um die Mengen an aufgereinigtem Zielprotein abschätzen zu können Pilotversuch mit…
Untersuchung des BMP-Signalwegs in HEK293-Zellen Folgende relevante Proteine wurden für die Analyse ausgewählt, da sie Schlüsselkomponenten in der frühen Signalkaskade von BMP darstellen: ALK2 wildtype receptor ALK2 mutated receptors: R206H (causes FOP (Fibrodysplasia ossificans progressiva)) Q207D (constitutive active) K235R (dominant negative) ALK6 wildtype receptor ALK6 mutated receptor (I200K): causes brachydactyl (shortness of the fingers and…
Bedeutung der gefundenen Interaktoren von ALK2 Diskussion: das intrazelluläre Netzwerk von ALK2 Das Interaktionsnetzwerk in U2OS-Zellen zeigt eine grosse Zahl regulatorischer Proteine, welche die Verteilung und den Abbau des Rezeptors innerhalb der Zellen regulieren Dies weist darauf hin, dass der ALK2-Rezeptor stark reguliert ist und nach Stimulation mit BMP4 internalisiert und degradiert werden könnte Dies…
Erste Belege für eine Rolle des BMP-Signalwegs in FOP 2006 konnte durch eine sogennante “Genome Linkage Analysis” an FOP (Fibrodysplasia ossificans progressiva)-betroffenen Familien gezeigt werden, dass eine Punktmutation in einem Zelloberflächenrezeptor bei FOP eine Rolle spielt (Shore et al., 2006) Der identifizierte Zelloberflächenrezeptor, ACVR1/ALK2, gehört zur Familie der Typ I Bone Morphogenetic Protein (BMP) Rezeptoren…