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Analyse der Interaktionen des BMP4-Liganden mittels LRC Vorgehen Die Ligand-Receptor Capture (LRC) Technologie erlaubt es, für einen bestimmten Liganden das Spektrum an Zelloberflächenrezeptoren, mit welchen er interagiert, zu bestimmen Zu diesem Zweck wird der Ligand mit einem speziellen Crosslinker modifiziert und dann mit Zielzellen inkubiert, welche die Rezeptoren exprimieren Bindet der Ligand an einen bestimmten…
Untersuchung des BMP-Signalwegs in HEK293-Zellen Folgende relevante Proteine wurden für die Analyse ausgewählt, da sie Schlüsselkomponenten in der frühen Signalkaskade von BMP darstellen: ALK2 wildtype receptor ALK2 mutated receptors: R206H (causes FOP (Fibrodysplasia ossificans progressiva)) Q207D (constitutive active) K235R (dominant negative) ALK6 wildtype receptor ALK6 mutated receptor (I200K): causes brachydactyl (shortness of the fingers and…
Etablierung der optimierten Crosslinking-Methode Neben dem optimierten Aufreinigungsprotokoll wurde versucht, eine neue Methode zur Aufreinigung zu etablieren Bei dieser Methode werden die Proteinkomplexe zunächst in situ verbunden (Cross-linking), um schwache und transiente Interaktionen sichtbar machen zu können Mit Ausnahme des Cross-Linking-Schrittes, welcher am Anfang des Aufreinigungsprotokolls steht, fand die Aufreinigung analog zu dem vorhergehenden Protokoll…