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Analyse U2OS-Zellen

Analyse des BMP-Signalwegs in U2OS-Zellen Vorgehen Um den BMP-Signalweg in U2OS-Zellen zu charakterisieren, wurden Pulldown-Versuche mit dem BMP-Rezeptor ALK2 durchgeführt Zunächst wurden wiederum die Aufreinigungsbedingungen für ALK2 wild-type und die ALK2 R206H-Mutanten aus U2OS optimiert Aufreinigungen im Pilotmassstab wurden zuerst mittels Western Blotting analysiert, um die Mengen an aufgereinigtem Zielprotein abschätzen zu können Pilotversuch mit…

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Diskussion

Bedeutung der gefundenen Interaktoren von ALK2 Diskussion: das intrazelluläre Netzwerk von ALK2 Das Interaktionsnetzwerk in U2OS-Zellen zeigt eine grosse Zahl regulatorischer Proteine, welche die Verteilung und den Abbau des Rezeptors innerhalb der Zellen regulieren Dies weist darauf hin, dass der ALK2-Rezeptor stark reguliert ist und nach Stimulation mit BMP4 internalisiert und degradiert werden könnte Dies…

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Untersuchung mit CaptiVate

Untersuchung des BMP-Signalweges mittels CaptiVate CaptiVate Aufreinigungsverfahren zur Analyse des Signalwegs CaptiVate™ Plattform: Beschreibung des Workflows Verwendung des Flp-In-Systems zur stabilen Expression Induzierbarer Promoter erlaubt regulierbare Expression  Teil I: Erstellung der stabilen Zelllinie Verwendung des Flp-In-Systems zur stabilen Expression Induzierbarer Promoter erlaubt regulierbare Expression     Teil II: Affinitätsreinigung des „Bait“-Komplexes Teil III: LC-MS/M-Analyse, bioinformatische…